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    技术支持
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  • Q:什么是adeno-associated virus (AAV)

    beplay体育苹果版回答:腺相关beplay软件下载ios(AAV)属于微小beplay软件下载ios科,是一类小的、二十面体、无包膜beplay软件下载ios。需要辅助beplay软件下载ios如腺beplay软件下载ios或疱疹beplay软件下载ios参与复制。AAV不编码自己的聚合酶,因此其复制过程依赖于宿主细胞的聚合酶活性。 AAV是一种复制缺陷beplay软件下载ios,复制依赖于其他辅助beplay软件下载ios,如腺beplay软件下载ios和疱疹beplay软件下载ios。
  • Q:什么是recombinant AAV(rAAV) & helper free rAAV?

    beplay体育苹果版回答:重组AAV(rAAV)是人工改造的AAV,没有编码AAVbeplay软件下载ios复制和结构蛋白的rep和cap基因。
    rAAV中与复制和包装相关的rep和cap 基因被替换为ITRs间的基因或结构,这使rAAV具有4.1-4.9 kb的包装容量。
  • Q:使用AAV有哪些生物安全性要求?

    beplay体育苹果版回答:可在生物安全1级(BSL-1)实验室操作生产无辅助beplay软件下载ios和编码非致癌基因的重组AAV。另外,应在生物安全2级(BSL-2)实验室封闭处理具有生物危害性的材料。
  • Q:重组AAV 安全吗?

    beplay体育苹果版回答:迄今为止,未发现野生型AAV有致病性。野生型AAV,在无需辅助beplay软件下载ios(如腺beplay软件下载ios)的存在下,复制效率非常低。重组腺相关beplay软件下载ios(rAAV)由多个质粒(cis质粒、辅助质粒、rep/Cap质粒)组成。Cis质粒、辅助质粒与rep/Cap质粒之间不具有同源性序列,因此重组AAV在理论上不具有复制的能力。
  • Q:重组AAVs的克隆容量有多大?

    beplay体育苹果版回答:AAV具有~4.7Kb的包装能力。2个ITR之间插入的DNA长度接近允许的较大值4.7Kb时,包装效率显著降低。例如,对于过表达来自cDNA的基因,CMV-poly(A)信号元件约为1KB,因此较大可包装的cDNA长度约为3.2kb,如果共表达GFP(约0.8kb),则可包装的容量大约为2.4kb。
  • Q:哪些血清型的 AAV 可供选择? 我该选用哪种AAV呢?

    beplay体育苹果版回答:目前为您提供的 AAV 血清型为 AAV1,AAV2,AAV5,AAV7,AAV6,AAV8 &  AAV9。请参阅下面指南中参考文献的建议。

    同时参阅转染效率与不同细胞类型对照表,以确定哪种血清型AAV更适合您的细胞。

  • Q:使用重组腺相关beplay软件下载iosrAAV传递基因的优势是什么?

    beplay体育苹果版回答:rAAVbeplay软件下载ios滴度很高,可感染分裂和非分裂细胞、免疫原性极小、体内表达外源基因时间长。 
  • Q:AAV 载体稳定吗? 如何保存AAV载体?

    beplay体育苹果版回答: 纯化的AAV载体在4℃或更低温度下高度稳定。建议您将AAV分装后,-80℃下长期保存。
  • Q:订制AAV服务,客户需要提供哪些材料? & 客户收到的产品是怎样的?

    beplay体育苹果版回答:您可以从我们的人源全长cDNA库(18,000预制ORF)中挑选,或者提供您的质粒DNA或DNA序列,我们将基因克隆至AAV载体。您还可以指定特定的融合标签和AAV血清型。
    基因沉默服务,请您提供确切的shRNA的序列以构建重组rAAV载体。我们的标准载体具有U6启动子和GFP标记。
    通常情况下,可为客户提供500 ulbeplay软件下载ios液 1×10^12-13 VP /ml。也可根据客户的需要,提供特定体积和滴度的产品。
  • Q:实验室前期一直在使用脂质体的方法进行转染细胞,但转染效率很低,现在想通过beplay软件下载ios的介导提高转染效率,不知道应该选择腺beplay软件下载ios还是慢beplay软件下载ios?

     

    beplay体育苹果版回答:(1)腺beplay软件下载ios和慢beplay软件下载ios均有各自的优缺点(见下表),应根据试验目的选择相应的beplay软件下载ios类型。(2)不同beplay软件下载ios在不同细胞中的感染效率存在差异,为帮助您选择感染效果较佳的beplay软件下载ios或血清型beplay软件下载ios,我们公司新研发出了“GFP-beplay软件下载ios检测试剂盒,可迅速、准确地帮助您寻找到适合您细胞的beplay软件下载ios载体。

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    基因组

    dsDNA

    ssDNA

    ssRNA(+)

    囊膜

    基因组大小

    38-39kb

    5kb

    9kb

    感染类型

    分裂和非分裂细胞

    分裂和非分裂细胞

    分裂和非分裂细胞

    与宿主基因组相互作用

    非整合

    非整合

    整合

    外源基因表达时间

    瞬时

    潜在长效

    长效

    包装容量

    7.5kb

    4.5kb

    6kb

    免疫原性

    非常低

    beplay软件下载ios滴度

    10E10pfu/ml

    10E13vg/ml

    10E

    转染效率

    100%

    70%

    70%

    外源基因表达量

  • Q:在操作和使用腺beplay软件下载ios和慢beplay软件下载ios载体时应注意哪些安全性问题?

     beplay体育苹果版回答:ViGene生物的腺beplay软件下载ios载体是复制缺陷型的人类血清5型腺beplay软件下载ios,E1E3基因缺失。ViGene生物的慢beplay软件下载ios载体是第三代的慢beplay软件下载ios载体, 将3’LTR的增强子功能进行了缺失,形成了所谓的“自灭活”,即该beplay软件下载ios基因组整合到细胞基因组后,不会产生新的子代beplay软件下载ios;5’LTRU3区替换成了CMV,是较安全的慢beplay软件下载ios载体。beplay软件下载ios实验应在BL2生物安全二级实验室操作,操作时应始终佩戴手套。
  • Q:AAV常见问题解答

    1.什么是Adeno-associated virus (AAV) &重组 AAV(rAAV) & helper free rAAV?

    腺相关beplay软件下载ios(AAV)属于微小beplay软件下载ios科,是一类小的、二十面体、无包膜beplay软件下载ios。AAV是一种复制缺陷beplay软件下载ios,复制依赖于其他辅助beplay软件下载ios,如腺beplay软件下载ios和疱疹beplay软件下载ios。AAV不编码自己的聚合酶,因此其复制过程依赖于宿主细胞的聚合酶活性。

    重组AAV(rAAV)是人工改造的AAV,没有编码AAVbeplay软件下载ios复制和结构蛋白的rep和cap基因。rAAV中与复制和包装相关的rep和cap 基因被替换为ITRs间的基因或结构,这使rAAV具有4.1-4.9 kb的包装容量。

    2.使用AAV有哪些生物安全性要求?

    可在生物安全1级(BSL-1)实验室操作生产无辅助beplay软件下载ios和编码非致癌基因的重组AAV。另外,应在生物安全2级(BSL-2)实验室封闭处理具有生物危害性的材料。

    3.重组AAV 安全吗?

    迄今为止,未发现野生型AAV有致病性。野生型AAV,在无需辅助beplay软件下载ios(如腺beplay软件下载ios)的存在下,复制效率非常低。重组腺相关beplay软件下载ios(rAAV)由多个质粒(cis质粒、辅助质粒、rep/Cap质粒)组成。Cis质粒、辅助质粒与rep/Cap质粒之间不具有同源性序列,因此重组AAV在理论上不具有复制的能力。

    4.重组AAVs的克隆容量有多大?

    AAV具有〜4.7Kb的包装能力。2个ITR之间插入的DNA长度接近允许的较大值4.7Kb时,包装效率显著降低。例如,对于过表达来自cDNA的基因,CMV-poly(A)信号元件约为1KB,可包装的cDNA长度约为3.2kb,如果共表达GFP(约0.8kb),则可包装的容量大约为2.4kb。

    5.哪些血清型的 AAV 可供选择?我该选用哪种AAV呢?

    目前为您提供的AAV 血清型为AAV1,AAV2,AAV5,AAV7,AAV6,AAV8 &  AAV9。请参阅下面指南中参考文献的建议。

                                                            

     

    AAV

    Serotype

    Muscle

    Hepatocyte

    Pulmonary

    Brain

    Retinal pigmented epithelium

    Pancreas

    Kidney

    AAV1

    X

     

     

    neuons and glial cells

    X

    X

     

    AAV2

     

     

     

     

     

     

    X

    AAV5

     

     

    lung alveolar cells

    neuons and glial cells

    X

     

     

    AAV6

    X

     

    X

     

     

     

     

    AAV7

    X

     

     

    neurons

    X

     

     

    AAV8

    X

    X

     

    neurons

    X

    X

     

    AAV9

    X

    X

    X

     

    X

    X

    X

     

    请同时参阅转染效率与不同细胞类型对照表,以确定哪种血清型AAV更适合您的细胞。

    6.使用重组腺相关beplay软件下载iosrAAV传递基因的优势是什么?

    rAAVbeplay软件下载ios滴度很高,可感染分裂和非分裂细胞、免疫原性极小、体内表达外源基因时间长。

    7.AAV 载体稳定吗? 如何保存AAV载体?  

    纯化的AAV载体在4℃或更低温度下高度稳定。建议您将AAV分装后,-80℃下长期保存。

    8.订制AAV服务,客户需要提供哪些材料? &客户收到的产品是怎样的?

    您可以从我们的人源全长cDNA库(17,000预制ORF)中挑选,或者提供您的质粒DNA或DNA序列,我们将基因克隆至AAV载体。您还可以指定特定的融合标签和AAV血清型。

    基因沉默服务,请您提供确切的shRNA的序列以构建重组rAAV载体。我们的标准载体具有U6启动子和GFP标记。

    通常情况下,可为客户提供500 ulbeplay软件下载ios液1×10^12 V.G. /ml。也可根据客户的需要,提供特定体积和滴度的产品。

  • Q:贵公司出售的pENTER-ORF中克隆的ORF序列与NCBI上公布的该基因的序列完全一致吗?

    beplay体育苹果版回答由于部分基因含有SNPs,因此,我们pENTER-ORF穿梭载体中克隆的ORF序列并不总是与NCBI上公布的该基因的序列完全一致,有些基因的序列与NCBI上公布的序列会有个别碱基的出入(有些碱基的突变为有义突变,有些为无义突变)。如果您需要与NCBI上公布的基因序列完全一致,我们可以提供相应的突变调整服务
  • Q:从贵公司购买的pENTER-ORF穿梭载体是否可以直接用于蛋白检测?

    beplay体育苹果版回答:可以直接用于蛋白检测,并且我们在ORFC’端融合了FlagHis标签,便于蛋白的检测和纯化。
  • Q:贵公司的慢beplay软件下载ios载体能筛选稳定转染的哺乳动物细胞吗?

    beplay体育苹果版回答: ViGene生物的慢beplay软件下载ios载体是第三代的慢beplay软件下载ios载体,您可以选择pLent-GFP-CMVpLent-puro-CMV载体,载体上的puromycin嘌呤霉素标签或GFP绿色荧光蛋白可以进行稳转细胞株的筛选。
  • Q:在什么情况下我该选用腺beplay软件下载ios载体作为将microRNA前体导入细胞的工具?

    A:您应先考虑以下几点:
    1.外源基因需要瞬时表达还是稳定的基因表达
    2.需转染分裂细胞还是非分裂的细胞
    3.对于靶细胞的潜在免疫原性
    4.beplay软件下载ios用来进行体内还是体外基因传递腺beplay软件下载ios载体能感染分裂和非分裂细胞。它适用于体内和体外基因传递,转染效率高,对外源基因瞬时表达量高。但相对于其他beplay软件下载ios载体系统,腺beplay软件下载ios载体在靶细胞中具有相对较高的免疫原性.



























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